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本药最初是由印度生物化学家Yellapragada Subbarao在1947年合成出来，他的大部分职业生涯都在美国。之后由美国儿科医生西德尼·法伯 (Sidney Farber)开始使用于癌症的临床治疗，因为其毒性较当时的其他药物低。1950年代，本药开始取代毒性更强的抗叶酸药物Aminopterin，于1956年时已用来作为转移性癌症的第一线治疗药物。本药现已列载于世界卫生组织基本药物标准清单上，代表其是医疗系统所需最有效且安全的药物之一，现今市面上也有其他的学名药 。2014年开发中国家中一日所需口服形式氨甲蝶呤批发价介在0.06美元到0.36美元之间。在美国，一个月的氨甲蝶呤治疗费用大约为25美元至50美元。
本药是目前最重要的控制抗类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis，RA)的药物之一，属于Disease-modifying antirheumatic drug(DMARDs)，其药理为减轻部份白血球（抗体）的炎症活动，进一步阻慢骨骼的损害。
本药仅可由对于抗代谢疗法具有知识及经验之医师使用。高剂量治疗恶性疾病曾有死亡之报告。
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稳定的过渡态可以降低反应所需的活化能，从而促进催化作用。例如，胰凝乳蛋白酶的蛋白酶含有负氧离子洞，以稳定蛋白质水解过程中形成的四面体中间阴离子，并保护底物中带负电的氧气不受水分子的影响。
另外，负氧离子孔也可以促进底物的进入与稳定。如果底物没有到达反应位点，负氧离子孔就找不到可供稳定化的目标，从而产生空阻直到底物到位（例如血红蛋白中的BPG）。
催化多步反应的酶可以具有多个负氧离子洞，以稳定反应中的不同过渡态。
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在物理学中，柯西视界（Cauchy horizon）是柯西问题（偏微分方程理论的特定边值问题）有效域的轻似边界。视界的一侧包含封闭的类空测地线，另一侧包含封闭的类时测地线。这个概念以奥古斯丁·路易·柯西命名。
在平均弱能量条件（AWEC）下，柯西视界本质上是不稳定的。然而，确实存在AWEC违规的情况，例如由周期性边界条件引起的Casimir效应，并且由于柯西视界内的时空区域具有闭合的时间曲线，因此它受到周期性边界条件的影响。如果我们可以假设柯西视界内的时空违反AWEC，则视界变得稳定，并且频率增强效应将被时空趋势作为发散透镜抵消。如果这个猜想在经验上是真实的，它将为强大的宇宙审查猜想提供一个反例。
最简单的例子是赖斯纳-努德斯特伦度规黑洞的内部视界。
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